Анализы. Полный медицинский справочник. Ключевые лабораторные исследования в одной книге - Коллектив авторов

0 – отсутствие окраски;

1 – красно-фиолетовый цвет;

2 – фиолетовый;

3 – красно-синий;

4 – синий;

5 – светло-синий и голубой;

6 – бесцветный.

Цифровое выражение по пробиркам: отрицательная реакция – 00 000 000 000; дегенеративная кривая – 666 654 320; воспалительная – 00 124 566 530.

Клиническое значение

При изменении альбумино-глобулинового коэффициента происходит изменение коллоидной реакции. Воспалительный тип реакции Ломге наблюдается при повышенном содержании α– и β-глобулинов, дегенеративный тип реакции бывает за счет увеличения мелкодисперсной фракции белка – альбуминов и снижения содержания глобулинов.

Большое значение имеют глобулиновые реакции при дифференциальной диагностике органических и функциональных нарушений, при неврастении, прогрессивном параличе и латентном сифилисе.

Определение крови в спинномозговой жидкости

Количественное определение крови

Метод основан на сравнении уровня гемоглобина в периферической крови и спинномозговой жидкости. М. М. Гунеф использовал для определения гемоглобина в ликворе 0,04%-ный раствор аммиака.

Ход определения

5 мл геморрагической спинномозговой жидкости центрифугируют в течение 10 мин, осадок растворяют в 5 мл 0,4%-ного раствора аммиака, можно брать и меньше, важно, чтобы количество жидкости и раствора аммиака было одинаковым. Кровь из пальца в количестве 20 мл смешивают с 5 мл 0,4%-ного раствора аммиака.

Концентрацию гемоглобина определяют на аппарате при длине волны 542.

Биохимические методы исследования

Определение глюкозы

Определение глюкозы в спинномозговой жидкости осуществляется с помощью цветной реакции или на биохимическом анализаторе так же, как и в крови. В норме в ликворе содержится глюкоза в пределах 2,8–3,9 ммоль/л. При остром и подостром серозном менингите содержание глюкозы увеличивается. Увеличение ее содержания в ликворе при нормальном содержании в крови наблюдается при явлениях раздражения оболочек мозга.

Определение содержания глюкозы в спинномозговой жидкости должно проводиться с исследованием сахара крови.

Унифицированный газооксидазный метод по окислению ортотолуидина

Глюкозооксидаза окисляет глюкозу с образованием перекиси водорода, которая под действием пероксидазы окисляет ортотолуидин с образованием синего хромогена. Обе реакции протекают одновременно при рН 4,8.

Необходимые реактивы

1. Натрия хлорид – 9 г/л (изотонический раствор). Готовят, растворяя 0,9 г NaCl в 100 мл жидкости.

2. Цинка сульфат – 50 г/л, 5 г сульфата цинка (ZnSO4) растворяют в воде, объем доводят до 100 мл.

3. Натр едкий – 0,3 ммоль/л готовят, растворяя в воде, доводят до 100 мл.

4. Натр едкий – 0,3 ммоль/л готовят, растворяя 1,2 г NaOH в 100 мл воды, концентрацию проверяют титрованием.

5. Ортотолуидина 1%-ный раствор: 1 г препарата растворяют в 100 мл 96%-ного спирта. Раствор можно хранить в холодильнике в склянке с притертой пробкой в течение нескольких месяцев.

6. Ацетатный буферный раствор pH 4,8: смешивают 4 части 0,25 г уксусной кислоты и 6 частей 0,25%-ного ацетата натрия.

7. Глюкозооксидаза. Сухой препарат активностью 3000 ЕД/мг или больше.

8. Пероксидаза из крови – 1 мл растворяют в 5 мл ацетатного буфера.

9. Рабочий реактив: в 80 мм ацетатного буфера растворяют 2 мг глюкозооксидазы и 1 мг пероксидазы, прибавляют 1 мл 1%-ного раствора ортотолуидина и доводят объем буферным раствором до 100 мл. Рабочий реактив должен быть прозрачным, бесцветным или иметь слабо-зеленый оттенок, в этом случае он устойчив при хранении на холоде. Если же окраска интенсивная или спустя несколько часов после хранения начинает выпадать осадок, это значит, что ортотолуидин недостаточно чистый и его надо перекристаллизовать.

10. Калибровочные растворы глюкозы. Глюкозу предварительно высушивают при 37 °С и хранят в эксикаторе. Сначала готовят основной раствор с концентрацией 50 ммоль/л, для чего 180 мл вещества растворяют в 20 мл насыщенного раствора 0,3%-ной бензойной кислоты. Из этого раствора готовят рабочие калибровочные растворы, содержащие 3; 6; 9; 12; 15; 18 и 21 ммоль/л. Для этого берут 0,6; 1,2; 1,8; 2,4; 3; 3,6 и 4,2 мл основного раствора и доводят насыщение раствором до 10 мл.

Ход определения

В центрифужные пробирки вносят 1,1 мл сульфата цинка и 0,4 мл 0,3%-ного раствора NaOH, перемешивают. При этом образуется тонкий гель гидрата окиси цинка, в него впускают 0,1 мл спинномозговой жидкости, снова перемешивают и в течение 10 мин центрифугируют. К 1 мл надосадочной жидкости добавляют 3 мл рабочего реактива и осторожно перемешивают. Постепенно развивается окрашивание, которое возникает максимум через 13–15 мин, а затем постепенно уменьшается. Фотометрируют через один и тот же промежуток времени после добавления рабочего реактива в кюветах с длиной оптического пути 1 см, длина волны 625 нм холостого опыта. При приготовлении калибровочного графика вместо проб крови берут 0,1 мл соответствующего калибровочного раствора. Расчет можно проводить по калибровочному графику, для построения которого на одной оси откладывают концентрацию глюкозы (моль/л), а на другой – величины экстинкции.

Определение хлоридов

Определение хлоридов может осуществляться методом титрования или на электролитном анализаторе.

Пониженное содержание хлоридов в ликворе характерно для менингита, особенно туберкулезного, при бруцеллезе, повышенное – при опухолях мозга, абсцессах мозга, эхинококкозе.

Определение мочевины, билирубина, холестерина

Имеет небольшое диагностическое значение.

Определение гликопротеинов и липопротеинов спинномозговой жидкости производят с помощью электрофореза на бумаге с предварительным сгущением жидкости.

Диагностика заболеваний

Для диагностики туберкулеза используются триптофановая реакция с 2%-ным формалином, 0,06%-ным раствором цитрата натрия и концентрированная соляная кислота.

Необходимые реактивы

1. 2%-ный водный раствор формалина (1 часть формалина и 19 частей дистиллированной воды).

2. 20,6%-ный раствор азотистого натрия (NaNO2), готовится ex tempera из 0,6%-ного раствора (1 часть его и 9 частей дистиллированной воды).

3. Концентрированная соляная кислота.

Ход определения

В широкую пробирку отмеривают 3 мл спинномозговой жидкости, прибавляют 15 мл концентрированной соляной кислоты и 2–3 капли раствора формалина, слегка встряхивают и дают постоять в течение 5 мин, а затем доливают 2 мл раствора азотистокислого натрия. При положительной реакции на границе жидкостей образуется нежное фиолетовое кольцо, которое при стоянии исчезает. При отрицательной реакции кольцо совсем не образуется или имеет коричневый цвет.

При туберкулезном менингите в отличие от менингита другой этиологии реакция часто бывает положительной.

Реакция Фридмана и Ференца

Метод основан на окислительно-восстановительной реакции раствора перманганата калия и осаждении белка трихлоруксусной кислотой.

Необходимые реактивы

1. 1%-ный водный раствор перманганата калия, приготовленный на бидистиллированной воде и постоявший не менее 2–3 недель.

2. 20%-ный раствор трихлоруксусной кислоты.

Ход исследования

К 1 мл ликвора