Британская ассоциация по ветеринарии мелких животных - Руководство по репродукции и неонатологии собак и кошек

Морфология сперматозоидов. Для проведения исследований готовят мазок образца спермы на предметном стекле по аналогии с мазком крови. После высыхания мазок окрашивают в течение 5 минут эозин-нитрозином, анилиновым синим или кристаллическим фиолетовым и изучают под микроскопом при 1000-кратном увеличении в иммерсионной среде. Чтобы дать заключение, подтверждающее наличие или отсутствие морфологических дефектов спермы, необходимо исследовать как минимум 100 сперматозоидов.

Лейкоциты. Чтобы определить число лейкоцитов в микролитре, подсчитывают их количество в четырех угловых квадратах гемоцитометра и умножают полученную цифру на 250. При подозрении на инфекцию необходим дифференцированный подсчет лейкоцитов.

Посев спермы. Если цитология эякулята дает основания предполагать наличие инфекции, проводят бактериологическое исследование семени и секрета предстательной железы.

Объем и рН эякулята. Определяют оба показателя.

Определение щелочной фосфатазы в сперме. Щелочная фосфатаза вырабатывается в придатке семенника и присутствует в сперме здорового кобеля. Низкая концентрация или отсутствие фирмента указывает на неполную эякуляцию или двустороннюю обструкцию придатков или семяпровода.

Характеристики эякулята здоровых кобелей приведены в табл. 8.1.

Незначительные отклонения от нормы не свидетельствуют о бесплодии. Иногда результат, неудовлетворительный по одному параметру, компенсируется превосходными показателями по другому, т. е. кобель со сниженной по сравнению с нормой концентрацией спермы может использоваться в качестве производителя благодаря повышенной подвижности сперматозоидов. В случае первичного бесплодия или неясностей в диагнозе рекомендуется провести повторный анализ спермы. Повторный сбор эякулята следует производить через 2 месяца после первого исследования, поскольку за этот период происходит переход к новому циклу сперматогенеза.

Параметр — Значение

pH — 6,3–6,7;

Объем: — 1–30 мл;

1-я фракция — 1–12 мл;

2-я фракция — 1–2 мл;

3-я фракция — до 20 мл;

Сперматозоиды: подвижность — > 70 %;

С нормальной морфологией — > 80 %;

С морфологическими дефектами — <20 %;

Количество сперматозоидов — >200 х 106;

Лейкоциты — < 2000/мл;

Щелочная фосфатаза (МЕ/л) — 5000–40000.

В связи с тем, что секреция многих гормонов носит импульсный характер, к интерпретации единичных анализов следует подходить с осторожностью. Многие заболевания, предполагающие эндокринологическое исследование, неизлечимы, поэтому необходимо принимать во внимание затраты на его проведение. Кроме того, дополнительные расходы могут возникать в связи с обращением в неспециализированные лаборатории, проводящие исследование в порядке исключения.

Приведенный ниже протокол поможет выявить источник эндокринной дисфункции.

Выработка тестостерона. Наиболее надежный метод оценки продукции тестостерона основан на применении стимуляционного теста с использованием человеческого ХГ (44 МЕ/кг внутримышечно) или ГнРГ (2,0 мкг/кг внутримышечно). Определение концентрации тестостерона проводят перед введением и спустя 4 часа после введения человеческого ХГ или перед введением и через час после введения ГнРГ Нормой считается пост-стимуляционная концентрация тестостерона в пределах 3,7–7,5 нг/мл.

Гонадотропины в сыворотке крови. В связи с эпизодическим характером секреции гонадотропинов для определения ЛГ и ФСГ рекомендуется проводить анализ по крайней мере 3 образцов, взятых с интервалом в 20–30 минут. Нормальными показателями считают соответственно 34–85 и 73–84 нг/мл.

Интерпретация данных эндокринного анализа. Низкое содержание тестостерона и ЛГ в сыворотке указывает на дисфункцию гипоталамуса, гипофиза или семенников. Устойчиво низкие значения ЛГ после введения ГнРГ (2,0 мкг/кг внутримышечно) позволяют предположить поражение гипоталамуса или гипофиза. Однако повышение уровня ЛГ в результате стимуляции с помощью ГнРГ указывает на нормальное функционирование гипоталамуса/гипофиза, следовательно, источником проблем являются тестикулы. Низкие показатели тестостерона при повышенной концентрации ЛГ указывают на дисфункцию клеток Лейдига. Концентрация ФСГ повышается у животных с дисфункцией семенников, вероятно, из-за нарушения выработки ингибина, обусловленного поражением гонад. Это повышение коррелирует со степенью расстройства сперматогенеза.

В отсутствие других изменений низкий уровень ЛГ следует интерпретировать с осторожностью, поскольку такие показатели характерны и для здоровых животных. Кроме того, низкая концентрация ЛГ может являться следствием терапии с назначением стероидов, анестетиков и седативных препаратов.

Исследование проводят при подозрении на бесплодие, вызванное заболеванием предстательной железы. Обзорная рентгенограмма каудальной части брюшной полости может выявить увеличение или другие поражения железы. Интерпретация полученных данных применительно к бесплодию зависит от анамнеза и возраста кобеля.

Широко применяется при обследовании предстательной железы и все чаще используется для оценки состояния тестикулов. Простату и тестикулы целесообразно исследовать в продольном и поперечном направлениях, используя сканер 5 МГц или лучше 7,5 МГц в режиме реального времени. Перед обследованием предстательной железы опорожняют кишечник при помощи клизмы. Кисты или абсцессы ясно визуализируются на экране. Наличие уплотненных участков указывает на развитие неоплазии или инфекцию. Ультразвуковое исследование семенников может выявить неоплазию, абсцессы или наличие полостей.

Применяется для постановки диагноза ценным производителям с персистентной азооспермией или олигозооспермией. Материал получают с помощью инцизионной или пункционной биопсии. Не рекомендуется проводить биопсию здоровым животным, поскольку она может вызывать ухудшение характеристик спермы в связи с воспалительными процессами, спровоцированными процедурой.

Инцизионная биопсия. Под общей анестезией через кожу и белочную оболочку семенника, зафиксированного как для кастрации, иссекается небольшой участок ткани. Образец ткани, содержащий семенные канальцы, извлекают с помощью тонкого лезвия. Материал помещают в консервирующий раствор, например, в раствор Буина или в формалиновый, после чего передают на исследование ветеринарному патологу.

Пункционная биопсия. Перед процедурой назначают седативные препараты, затем вводят тонкую иглу диагонально в вентральную часть семенника. В принципе процедура может вызвать атрофию тестикулов, но, как правило, этого не происходит.

ЛЕЧЕНИЕ БЕСПЛОДИЯ У КОБЕЛЕЙ

Бесплодие излечимо, если вызвавшие его заболевания и обстоятельства, такие, как дерматиты мошонки, незначительные физические и психологические стрессы, некоторые препараты и токсины, носили эпизодический характер и не привели к серьезным нарушениям репродуктивного тракта. Выздоровление после перечисленных заболеваний может длиться от 2 до 6 месяцев. Причина такого продолжительного восстановительного периода не только в том, что цикл сперматогенеза занимает около 62 дней, но и в том, что для улучшения низких показателей спермы требуется смена нескольких циклов. Исходя из этих соображений, кобеля-производителя считают здоровым лишь после получения положительных результатов двукратных исследований, проведенных с 2-месячным интервалом.

Лечение кобелей, демонстрирующих сниженное либидо

Лечение затруднено и часто безуспешно (фиг. 8.1). Развитию патологии способствуют ошибки в практике проведения вязки и в содержании собаки. Вязки следует проводить с опытной, спокойной сукой и в соответствующей обстановке. Робкого самца можно ободрить, предоставив ему возможность наблюдать за вязкой с участием опытного производителя. Есть вероятность, что терпение, время и вязки со спокойными опытными суками вернут самцу уверенность и сгладят последствия травмирующей ситуации. Правильный диагноз и успешное лечение заболеваний, приводят к восстановлению нормального либидо. Чтобы исключить гипотиреоз, следует проверить функцию щитовидной железы. Если затруднения при вязке связаны с болезненностью суставов, в какой-то мере помогает назначение нестероидных противовоспалительных препаратов. В некоторых случаях для разрешения проблемы достаточно коррекции приобретенных или врожденных дефектов наружных половых органов (фимоза или уздечки). Для поддержания производителя в хорошей физической форме нужно придерживаться легкоусвояемой калорийной диеты. Лечение идиопатических или генетически обусловленных случаев нарушения либидо, как правило, бесперспективно. Противопоказана терапия тестостероном, несмотря на то, что при отсутствии либидо его концентрация обычно снижена. Введение тестостерона приводит к его включению в механизм отрицательной обратной связи с гипофизом, вызывая снижение выработки ЛГ. Помимо этого длительное применение тестостерона оказывает отрицательное воздействие на сперматогенез, ухудшая характеристики спермы. В клинических ситуациях, требующих повышения концентрации тестостерона, автор настоящей главы применял ГнРГ 2,0 мкг/кг внутримышечно или человеческий ХГ 500 ME подкожно дважды в неделю в течение 3 месяцев для стимуляции клеток Лейдига и соответственно выработки эндогенного тестостерона. Однако эта методика недостаточно проверена, и результат лечения неоднозначен. При отсутствии либидо сперму можно собирать специальными методами и использовать для искусственного осеменения, но такая практика способствует передаче дефекта потомству, а потому неэтична.